使用ARIA進行高通量組織成像的自動化免疫標記

Fluigent 儀器 ARIA 與寬場顯微鏡結合以執行自動化多重組織成像

使用自動免疫標記方法對組織樣本進行高內容成像，該方法包括抗體標記、成像和使用鋰硼氫化物（LiBH4）進行熒光染料漂白的迭代循環。圖像處理和配準使用 SimpleITK 開源軟體進行。

要執行自動化的 IBEX 研究， 完整的設置 包含幾個設備： 

一個壓力源（這裡用的是Fluigent的 FLPG）
一個單輸出 序列灌注系統 ARIA 
一個封閉式浴槽成像室，內含組織切片和來自 Warner Instruments 的加熱平台
來自徠卡的 THUNDER 顯微鏡

使用 ARIA 軟體 ，創建了一種包含所有液體注射和影像獲取步驟的方法。一旦加載，該序列可以自動運行 。自動免疫標記方法依賴於 ARIA 發送和接收的 TTL 信號，使得在注射步驟結束時啟動影像獲取循環。該軟體與 Leica THUNDER 顯微鏡進行了介面連接。

一旦獲得影像，接下來的流體注射步驟開始，以漂白前一輪，然後開始用下一個面板進行抗體染色，接著再次觸發顯微鏡獲取。最終，整個步驟序列產生了超過30個標記的高品質多重蛋白水平數據。

固定的人類組織，包括腸繫膜淋巴結、小腸和皮膚，已進行分析（圖1、2）。由於這些組織的細緻結構和高背景自發螢光，通常很難進行成像。

正如作者所述，原始的 IBEX 方法受到手動執行（抗體染色和螢光染料失活的手動移液）要求的限制。在此，ARIA 提供了一種經濟實惠的自動化解決方案，以便在空間生物學革命中獲得高內容成像。